Identificação de proteínas secretadas pelo sistema de secreção tipo vi de xanthomonas citri por ensaios de duplo híbrido em leveduras

Resumo

Os sistemas de secreção do tipo VI são maquinarias de transporte de proteínas para células-alvo, que atuam em diversos aspectos da fisiologia bacteriana, incluindo virulência e competição com micro-organismos no ambiente. O sistema de secreção tipo seis (SSVI) de Xanthomonas citri pv. citri (X. citri) é essencial para a resistência da bactéria à ameba de solo Dictyostelium discoideum. X. citri é um importante fitopatógeno, que causa a doença cancro cítrico em todos os cultivares de citros importantes na atividade agrícola brasileira. Assim, é importante identificar os mecanismos moleculares de atuação do SSVI e as proteínas por ele secretadas (efetores), que conferem o fenótipo de resistência. O presente trabalho tem por objetivo identificar proteínas que interagem com os componentes do SSVI PAAR e VgrG, proteínas responsáveis pelo recrutamento de efetores para secreção. Para isso, utilizamos a metodologia de duplo híbrido em leveduras, buscando-se detectar interações de proteínas codificadas por biblioteca genômica de X. citri com as proteínas estruturais do SSVI VgrG e PAAR. Paralelamente, estamos realizando testes de interação direta entre duas proteínas que são fortes candidatas a efetores com PAAR e VgrG. Interações positivas foram obtidas em ensaios de duplo híbrido com biblioteca genômica de X. citri usando-se as proteínas VgrG e PAAR como iscas e o projeto encontra-se atualmente em fase de identificação destas interações por sequenciamento dos clones positivos.