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Propagação de car (cilia-associated respiratory) bacillus em cultura de células e padronização da reação da polimerase em cadeia com transcrição reversa (rt-pcr
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Palavras-chave

CAR bacillus. RT-PCR. RNA.

Como Citar

ANDRADE, Lenira Aparecida Guaraldo de; DEMOLIN, Daniele Masselli Rodrigues; MARTINS, Sandra Soares; PASSOS, Luiz Augusto Correa; ALVES, Delma Pegolo; GILIOLI, Rovilson. Propagação de car (cilia-associated respiratory) bacillus em cultura de células e padronização da reação da polimerase em cadeia com transcrição reversa (rt-pcr. Sínteses: Revista Eletrônica do SimTec, Campinas, SP, n. 2, p. 209–209, 2016. Disponível em: https://econtents.bc.unicamp.br/inpec/index.php/simtec/article/view/8576. Acesso em: 16 abr. 2024.

Resumo

CAR bacillus é uma bacteria extracelular, gram negativa, que está associada à doença respiratória em colônias convencionais de camundongos e ratos. O objetivo deste estudo foi realizar a padronização do RT-PCR a fim de detectar a infecção por CAR bacillus em colônias de ratos e camundongos. A cepa CB-M proveniente do CIEA (Japão) foi utilizada nos experimentos. Células murinas 3T3 fibroblastóides foram infectadas e quando do aparecimento de efeito citopático, congeladas. A bactéria foi visualizada através da coloração pela prata. Grupos de camundongos foram infectados através de inoculação intranasal e amostras de swabs oral, nasal, traquéia e pulmão foram coletadas nos dias 7,12,15,19,28 após a infecção. O RNA foi extraído usando TRIzol para posterior amplificação. Primers específicos foram testados sob diferentes concentrações. Os soros foram submetidos à imunofluorescência indireta para a detecção de anticorpos, através de células 3T3 infectadas. A presença da bactéria na suspensão celular foi confirmada através do RT-PCR e o produto amplificado de 133 pares de base observado. Resultados positivos no RTPCR dos pulmões foi obtido nos dias 15,19 e 28 pós infecção e anticorpos após 8 semanas.
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Copyright (c) 2016 Lenira Aparecida Guaraldo de Andrade, Daniele Masselli Rodrigues Demolin, Sandra Soares Martins, Luiz Augusto Correa Passos, Delma Pegolo Alves, Rovilson Gilioli

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