Propagação de car (cilia-associated respiratory) bacillus em cultura de células e padronização da reação da polimerase em cadeia com transcrição reversa (rt-pcr

Autores

  • Lenira Aparecida Guaraldo de Andrade Universidade Estadual de Campinas
  • Daniele Masselli Rodrigues Demolin Universidade Estadual de Campinas
  • Sandra Soares Martins Universidade Estadual de Campinas
  • Luiz Augusto Correa Passos Universidade Estadual de Campinas
  • Delma Pegolo Alves Universidade Estadual de Campinas
  • Rovilson Gilioli Universidade Estadual de Campinas

DOI:

https://doi.org/10.20396/sinteses.v0i2.8576

Palavras-chave:

CAR bacillus. RT-PCR. RNA.

Resumo

CAR bacillus é uma bacteria extracelular, gram negativa, que está associada à doença respiratória em colônias convencionais de camundongos e ratos. O objetivo deste estudo foi realizar a padronização do RT-PCR a fim de detectar a infecção por CAR bacillus em colônias de ratos e camundongos. A cepa CB-M proveniente do CIEA (Japão) foi utilizada nos experimentos. Células murinas 3T3 fibroblastóides foram infectadas e quando do aparecimento de efeito citopático, congeladas. A bactéria foi visualizada através da coloração pela prata. Grupos de camundongos foram infectados através de inoculação intranasal e amostras de swabs oral, nasal, traquéia e pulmão foram coletadas nos dias 7,12,15,19,28 após a infecção. O RNA foi extraído usando TRIzol para posterior amplificação. Primers específicos foram testados sob diferentes concentrações. Os soros foram submetidos à imunofluorescência indireta para a detecção de anticorpos, através de células 3T3 infectadas. A presença da bactéria na suspensão celular foi confirmada através do RT-PCR e o produto amplificado de 133 pares de base observado. Resultados positivos no RTPCR dos pulmões foi obtido nos dias 15,19 e 28 pós infecção e anticorpos após 8 semanas.

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Biografia do Autor

Lenira Aparecida Guaraldo de Andrade, Universidade Estadual de Campinas

CEMIB/ UNICAMP

Daniele Masselli Rodrigues Demolin, Universidade Estadual de Campinas

CEMIB/ UNICAMP

Sandra Soares Martins, Universidade Estadual de Campinas

CEMIB/ UNICAMP

Luiz Augusto Correa Passos, Universidade Estadual de Campinas

CEMIB/ UNICAMP

Delma Pegolo Alves, Universidade Estadual de Campinas

CEMIB/ UNICAMP

Rovilson Gilioli, Universidade Estadual de Campinas

CEMIB/ UNICAMP

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Publicado

2016-09-12

Como Citar

ANDRADE, L. A. G. de; DEMOLIN, D. M. R.; MARTINS, S. S.; PASSOS, L. A. C.; ALVES, D. P.; GILIOLI, R. Propagação de car (cilia-associated respiratory) bacillus em cultura de células e padronização da reação da polimerase em cadeia com transcrição reversa (rt-pcr. Sínteses: Revista Eletrônica do SimTec, Campinas, SP, n. 2, p. 209–209, 2016. DOI: 10.20396/sinteses.v0i2.8576. Disponível em: https://econtents.bc.unicamp.br/inpec/index.php/simtec/article/view/8576. Acesso em: 1 dez. 2022.

Edição

Seção

Eixo 2 - Desenvolvimento de Ensino, Pesquisa e Extensão

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