Avaliação espermática como ferramenta para otimizar técnicas de reprodução assistida com camundongos transgênicos

Resumo

A avaliação da concentração de espermatozóides permite identificar o estado e desempenho reprodutivo animal, podendo ser útil na reprodução em laboratório. Este trabalho tem como objetivo avaliar a quantidade de espermatozóides entre machos virgens e reprodutores oriundos das áreas de criação do CEMIB/UNICAMP, com vistas a otimizar protocolos de reprodução assistida empregados em linhagens transgênicas com perdas reprodutivas. Para tanto, foram observados a concentração, motilidade e morfologia, variáveis essenciais à reprodução assistida. No presente estudo foram coletados os dois epidídimos e o canal deferente de machos das linhagens C57BL/6, BALB/c e híbrido B6C-F1. Para a realização da técnica, os órgãos foram depositados em 150ul de meio HTF, picotados para a saída dos espermatozóides e transferidas para estufa a 36°C com 5% de CO2 por cinco minutos. O meio com os espermatozóides foi recolhido e alojado em tubos de 0,5ml. Para a contagem em câmara de Neubauer, uma alíquota recebeu formalina carbonatada 2,5%. Foram observadas as seguintes quantidades de espermatozóides por animal: C57BL/6 reprodutor = 208x106 ; virgem = 104x106 ; BALB/c reprodutor = 118x106 e virgem = 78x106 ; B6C-F1 reprodutor = 179x106 ; virgem = 102x106 . Os resultados demonstraram uma diferença significativa no nº de espermatozóides, tanto entre as linhagens como na comparação entre machos virgens e reprodutores, demonstrando que a análise seminal é essencial à Fertilização In Vitro (FIV) para modelos animais geneticamente modificados e que os parâmetros analisados convencionalmente (concentração, motilidade e morfologia) não revelam defeitos mais sutis dos espermatozóides, como imprinting genômico e a fragmentação de DNA.