Avaliação da especificidade da nested-pcr em relação aos oligonucleotídeos s35, s36 e s67 utilizados na detecção do kdna de trypanosoma cruzi em amostras de sangue de pacientes chagásicos crônicos

Resumo

A doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, é uma enfermidade que ainda representa um grave problema de saúde publica. Seu diagnóstico é realizado com base nos aspectos clínicos, epidemiológicos e em testes laboratoriais. A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) é, dentre os testes, uma técnica com alta sensibilidade e especificidade, tendo como alvo o kDNA do T. cruzi. O objetivo do trabalho foi avaliar a Nested-PCR com iniciadores específicos para a região do kDNA, afim de evitar resultados falsos-positivos devido à infecção causada por outros parasitas da ordem Kinetoplastida. Amostras de pacientes chagásicos crônicos sorologicamente positivos e amostras sorologicamente positivas para Leishmania sp. foram submetidas a extração do DNA, reação de amplificação do gene da β-globina humana e à Nested-PCR. Os iniciadores utilizados para a Nested-PCR foram os S35/S67 para a 1ª reação e S35/S36 para a 2ª reação. Comprovou-se uma especificidade de 100% dos oligonucleotídeos, pois nenhuma amplificação inespecífica com DNA de Leishmania sp. foi observada e sim amplificações específicas do kDNA de T. cruzi., sendo assim, os oligonucleotídeos testados foram considerados específicos para o diagnóstico da doença de Chagas pela Nested-PCR